Hypoxyprobe^TM-1 Kit 缺氧探针检测试剂盒

搜索关键词：

Hypoxyprobe, Inc.（缺氧探针公司）；Pimonidazole HCl；缺氧标志物（Hypoxia maker）；Chemicon Inc.；

产品应用：

免疫化学法检测细胞和组织缺氧情况，包括免疫荧光（IF），免疫过氧化物酶，WB或流式细胞分析（FC）；

试剂盒组分：

试剂盒组分详细描述：

一、Hypoxyprobe-1

Hypoxyprobe-1是2-硝基咪唑的替代物，其化学名和wei一成分是Pimonidazole hydrochloride（Pimonidazole HCl），分子量为290.8，水溶性为400mM（=116 mg/ml），紫外吸收（324nm）的吸光系数为7020（0.9%生理盐水）。

Hypoxyprobe-1的粉末和溶液形式皆具化学稳定性。比如，固体形式的Hypoxyprobe-1于柔弱光线下室温保存2年，UV和HPLC分析法评估无任何降解发生。溶于0.9%生理盐水的Hypoxyprobe-1，浓度100g/L置于2-8℃保存4.5年，UV和HPLC分析法评估无任何降解发生。

作用机理：缺氧细胞中Pimonidazole被还原后得以活化。这一活化的中间物与蛋白质、多肽和氨基酸中的巯基基团（thiol groups）形成稳定的加合物。Mab1抗体结合这些加合物从而能借由免疫化学法来检测。

二、MAb1抗体

MAb1是小鼠IgG1单克隆抗体（克隆4.3.11.3），为杂交瘤细胞克隆4.3.11.3表达液过滤除菌后得到的上清液，含60μg/ml MAb1和0.15%叠氮钠。

感兴趣组织可用免疫组化检测（IHC），冰冻切片或者福尔马林固定的石蜡包埋切片；也可组织降解后用流式分析法检测；或用WB检测。典型情况下，MAb1抗体经1:50稀释后，取100μl到组织切片上。然后加合适的二抗方法来检测Pimonidazole加合物。

使用指南：

1、 Animal Studies 动物研究

研究正常或肿瘤组织缺氧首先通过静脉注射（intravenous infusion）、腹腔注射（intraperitoneal injection）或口服（oral ingestion）法给Hypoxyprobe-1溶液，剂量为60mg/kg体重。比如，25g小鼠的探针用量为1.5mg/只小鼠。（高达400mg/kg的剂量用于小鼠无可见毒性或引起组织缺氧变化，但60mg/kg以zui低成ben给予良好的染色结果）。

给药后，Hypoxyprobe-1分布到包括大脑的所有组织，且仅仅在氧浓度≤14μM（相当于pO2=10mm Hg，37℃）的细胞内与蛋白质巯基形成加合物。除了肿瘤之外，正常组织如肝脏、肾脏和皮肤含pO2等于或低于10mm Hg的细胞，也会结合Hypoxyprobe-1。

2、Tissue cultures 组织培养

通常情况下，细胞悬液置于含100-200μM Hypoxyprobe-1的缺氧环境中孵育1-2h。之后细胞离心涂片、固定、MAb1和显色或荧光二抗染色。

订购信息：原装正品，现货供应。

文件下载：

1、HP1-Hypoxyprobe™-1 Kit 操作手册

2、Hypoxyprobe frequently asked questions (FAQ) 常见问题

3、Hypoxyprobe Kit Application 应用文献

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