mf2330-大肠杆菌化学感受态细胞表达分析

Mach1-T1 Chemically Competent Cell

大肠杆菌化学感受态细胞

产品订购：更大包装或产品技术问题

产品组分：

菌株描述

Mach1-T1菌株是由野生型W菌株改造所得的大肠杆菌菌株，与其它标准克隆菌株相比，具明显加快的倍增速度。Mach1-T1倍增时间约为50min，相比之下其它克隆菌株＞74min。对于Mach1-T1感受态细胞，在氨苄选择性平板上接种转化混合物约9h可见克隆，使得研究人员可在同一天进行平板培养和克隆挑取工作。

Mach1-T1菌株还具有其它特征使其适合用于绝大多数的克隆研究，包括：①endA1突变提高质粒的产量和质量；②tonA突变赋予菌株对T1和T5噬菌体的抗性；③lacZΔM15使其能对重组克隆进行蓝白班筛选；④∆recA1398突变降低克隆DNA进行同源同组的频率；⑤hdsR突变使其能有效转化PCR制备所得的非甲基化DNA。

Mach1-T1菌株基因型：F-φ80(lacZ)ΔM15 ΔlacX74hsdR(rK- mK+) ΔrecA1398endA1tonA

产品描述

本品是Mach1-T1菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。经pUC19质粒（AmpR）检测转化效率＞1×109 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

保存与运输条件：

保存：-80℃保存，六个月有效。

运输：干冰运输。

注意事项

1） 感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存，不可反复冻融且放置时间过长，否则会减低感受态细胞的转化效率。

2） 最好在冰上融化感受态细胞。

3） 转化高浓度质粒或高效连接产物需相应减少最终涂板的菌量。

4） 进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。

5） 为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到zui低。

6） 产品包装内含质粒pUC19 DNA(10 pg/μl)，供对照实验用。

7） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1） 从-80℃冰箱取出取感受态细胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌块融化，加入目的DNA（质粒或连接产物），用手轻弹管底轻轻混匀（避免用枪吹打），冰浴静置25min。

2） 42℃热击45s，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。

3） 向每个离心管中加入700 μl无菌的2YT或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床，200 rpm振荡培养60min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。

4） 5000rpm离心1min，留取100μl左右轻轻吹打重悬菌体，加到含相应抗生素的2YT或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养箱培养。如果使用氨苄选择性平板，约9h能见到克隆，但，蓝白班筛选需至少培养13h。如使用氨苄之外的选择性平板，需过夜培养平板。

【注意】：

a） 为了获得最佳的生长状态，有必要涂板前将选择性平板放到37℃预热30min。

b） 若需获得高产量的质粒，推荐用TB培养基

c） 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板；反之，若转化的DNA总量较少，可将所有转化产物涂布平板。

d） 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

e） 涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

附表1固体和液体LB培养基配方

附表2固体和液体2-YT培养基配方

— —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科学和生物技术领域研究的试剂、仪器和实验室消耗品与实验服务工作，主要从事细胞生物学、植物学、分子生物学、免疫学、生物化学、蛋白组学。生物制药与诊断试剂研发生产等领域。 本公司秉承“以人为本，以诚为信、合同守信”的经营理念。坚持"品质保障"的原则为广大客户提供优质产品。

大肠杆菌化学感受态细胞表达分析大肠杆菌化学感受态细胞表达分析