mf2337-大肠杆菌化学感受态细胞表达分析

BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL Competent Cell 大肠杆菌化学感受态细胞

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菌株描述

BL21-CodonPlus菌株来源于Stratagene公司高性能的BL21-Gold菌株，特别适合在大肠杆菌内高水平表达异源蛋白。由于异源蛋白来源宿主大量存在的某些tRNA在大肠杆菌内很是稀少，因此，想在大肠杆菌内有效表达异源蛋白通常受到限制。外力驱动下的高水平表达异源蛋白会耗尽已有的稀有tRNA，导致翻译中止。BL21-CodonPlus菌株正是根据此缺陷而基因改造后的菌株，额外添加在大肠杆菌内最常见限制异源蛋白表达的几种tRNA的基因拷贝。这些tRNA的存在使得许多原来在传统BL21菌株内表达很弱的异源蛋白能够在BL21-CodonPlus菌株内大量表达。BL21-CodonPlus-RIPL补充大肠杆菌缺乏的4种稀有密码子（AGA, AUA, CCC, CUA）对应的tRNA（argU, ileY, proL, leuW），显著提高外源基因，尤其是富含AT-或GC-基因的异源蛋白在大肠杆菌内的表达。

BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL菌株染色体还整合了λ噬菌体DE3溶原体（其上携带lacUV5启动子调控的T7 RNA聚合酶基因），可用于pET系列、pGEX、pMAL等载体的蛋白表达，同时具有四环素，氯mei素，链mei素和壮观mei素抗性。

BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL菌株基因型：F–ompT hsdS(rB–mB–)dcm+ TetRgal λ(DE3) endA Hte [argU proL CamR] [argU ileY leuW Strep/SpecR]

产品描述

本品是大肠杆菌BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热激转化。经pUC19质粒检测转化效率可达108 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

保存与运输条件

保存：-80℃保存，六个月有效。

运输：干冰运输。

注意事项

1）   感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存，不可反复冻融且放置时间过长，否则会减低感受态细胞的转化效率。

2）   最好在冰上融化感受态细胞。

3）   进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。

4）   为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到zui低。

5）   产品包装内含质粒pUC19 DNA(10pg/μl)，供对照实验用。

6）   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1）  从-80℃冰箱取出取感受态细胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌块融化，加入目的DNA，用手轻弹管底轻轻混匀，冰浴静置25min。

2）   42℃热激45s，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3min。此过程不要摇动离心管。

3）   向每个离心管中加700 μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃ 摇床，200 rpm振荡培养60min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。

4）   低速离心收菌（比如4000rpm，2min），留取100μl左右上清，用枪轻轻吹打重悬菌块，之后加到含氯mei素（34μg/ml）以及所选质粒筛选抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16h。

【注意】：

a）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可不用离心，直接取少量转化产物涂布平板；反之，若转化的DNA总量较少，则通过离心（4,000 rpm，2min）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

b）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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