mf2319-大肠杆菌化学感受态细胞表达分析

BJ5183-AD-1 Chemically Competent Cell

大肠杆菌化学感受态细胞

产品标签：

BJ5183-AD-1；BJ5183；pAdeasy-1；pAdeasy-2；腺病毒系统；卡那mei素；链mei素；

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产品组分：

菌株描述

BJ5183菌株是一种具较高重组活力的大肠杆菌菌株，提供了转移载体和含腺病毒基因组载体之间发生重组事件必要的元件，是目前腺病毒系统zui常用的菌株之一。BJ5183菌株含recBC sbcBC双重突变，赋予其较强的重组能力，有利于目的基因与腺病毒骨架质粒的重组。另外，BJ5183菌株含endA突变（编码核酸内切酶），这一突变赋予recBC sbcBC突变菌株更高的双链断裂修复活性，也有利于重组DNA的稳定和高纯质粒的提取。StrR赋予BJ5183菌株链mei素抗性。

BJ5183-AD-1菌株是携带腺病毒质粒pAdeasy-1（E1/E2 deleted）的BJ5183菌株，pAdeasy-1孵育该菌株氨苄抗性（AmpR）。在病毒质粒构建时，只需转入线性化目的质粒即可，简化实验步骤，提高了病毒质粒重组概率。

BJ5183-AD-1菌株基因型：endA1sbcBCrecBCgalKmet thi-1bioThsdR (StrR) [pAdEasy-1 (AmpR)]

产品描述

本品是大肠杆菌BJ5183-AD-1菌株经特殊工艺制作所得的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。经pCAMBIA2301载体检测转化效率>1×105 cfu/μg DNA。且在-80℃能稳定保存几个月转化效率不发生改变。

保存与运输条件：

保存：-80℃保存，六个月有效。

运输：干冰运输。

注意事项

1） 感受态细胞必须用干冰运输。感受态细胞应在-80℃保存（避免温度波动），不可反复冻融且放置时间过长，否则会减低感受态细胞的转化效率。

2） 最好在冰上缓慢融化感受态细胞。不可在冰上放置时间过长，否则会降低转化效率。

3） 进行转化操作时，需在相应温度及无菌条件下进行。

4） 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

5） 为防止转化实验不成功，可保留部分连接反应液以重新转化，将损失降到zui低。

6） 产品包装内含载体pCAMBIA2301 DNA(10 ng/μl)，供对照实验用。

7） BJ5183-AD-1菌株的质粒产量不高。腺病毒构建成功后，可选择在其它大肠杆菌菌株扩繁和纯化质粒。

8） BJ5183-AD-1感受态细胞对温度敏感，需储存在-80℃超低温冰箱，避免温度波动，以免感受态转化效率降低。

9） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在无菌条件的标准下进行】

1） 从-80℃冰箱取出取感受态细胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌块融化，加入目的质粒（含有目的基因并且是线性化），用手轻弹管底轻轻混匀（避免用枪吹打），冰浴静置25min。

2） 42℃水浴热激45s，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2min。此过程不要摇动离心管。

3） 向每个离心管中加入700 μl无菌的2YT或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床，200 rpm振荡培养60min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。

4） 低速离心收菌（比如5000rpm，1min），留取100μl左右上清，用枪轻轻吹打重悬菌块，之后加到含相应抗生素的2YT或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于室温（或37℃）直至液体被吸收，之后倒置放于37℃过夜培养。

【注意】：

a）涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可不用离心，直接取少量转化产物涂布平板；反之，若转化的DNA总量较少，则通过离心（5,000 rpm，1min）后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。

b）新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。

c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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