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Calcein Blue, AM 钙黄绿素蓝(蓝色)
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产品关键词:
Calcein Blue, AM 钙黄绿素蓝;Calcein, AM 钙黄绿素;Calcein Red钙黄绿素红;DAPI;活细胞染色探针; CAS NO:168482-84-6;
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格(元) |
Calcein Blue, AM 钙黄绿素蓝(蓝色) | MX3015-1MG | 1mg | 1315 |
【温馨提示】:见我司懋康生物(maokangbio)整理的Calcein 钙黄绿素(常用的活细胞荧光探针)专题。
产品描述
Calcein, AM,中文名钙黄绿素乙酰甲酯,CAS NO:148504-34-1,一种具细胞膜渗透性zui受huan迎的活细胞荧光染料,用来标记和监测活细胞功能,呈绿色荧光(Ex/Em= 490nm/515nm)。然而,Calcein, AM单一颜色使其不能将其用在多重标记实验,比如,其无法和GFP转染细胞联合使用,因光谱一致。为了解决这一应用缺陷,我司特别开发出Calcein Blue, AM、Calcein Red, AM等,实现联合Calcein, AM对活细胞的多重标记和功能分析。
Calcein Blue, AM本身仅呈微弱荧光(Ex/Em~322/435nm),具有细胞膜渗透性。一旦进入细胞后,被细胞内酯酶水解为钙黄绿素蓝(Calcein Blue),探针极性增强并能保留在细胞内数小时,此时荧光强度增强且荧光光谱迁移到更长波长(Ex/Em~360/445nm),光谱特征类似于DAPI、Hoechst 33342或Hoechst 33258。
产品特性
1) CAS NO:168482-84-6
2) 化学名:N-[2-[(acetyloxy)methoxy]-2-oxoethyl]-N-[(7-hydroxy-4-methyl-2-oxo-2H-1-benzopyran-8-yl) methyl]-glycine, (acetyloxy)methyl ester
3) 同义名:Calcein Blue Acetoxymethyl ester钙黄绿素蓝乙酰氧基甲酯;
4) 分子式:C21H23NO11
5) 分子量:465.41
6) 纯度:≥90%
7) Ex/Em:360/445nm
8) 溶解性:溶于DMSO(1~5mM)
9) 化学结构式:
保存与运输方法
保存:-20℃避光干燥保存,至少一年有效。
运输:冰袋运输。
注意事项
1) 荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。
2) 乙酰氧基甲基酯(AM)易吸潮,冰箱取出后请在干燥的环境放至室温后再开封。由于试剂微量,开封前请将其短暂离心,以保证粉末落入管底。
3) Calcein Blue, AM对湿度非常敏感,粉末保存一定要保持干燥。Calcein Blue, AM储存液需要分装避光冻存,且必须紧紧密封盖子,干燥保存。Calcein Blue, AM工作液必须现配现用。
4) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
A, 储存液制备
储存液配制范围可为1~5 mM,具体根据工作浓度来决定,建议提前配制成1000×储存液。若使用的工作液为5μM,那么可配制5mM的储存液,即往1mg Calcein Blue, AM(Mw:465.41)内加入430μl 细胞培养级别的DMSO(货号:MS4601A-100ML),充分溶解,混匀。储存液根据单次用量分装-20℃保存,避免反复冻融,数月稳定(不要超过6个月)。
B, 20% Pluronic F-127制备【可选】
称取100mg Pluronic F-127粉末(货号:MS4301-100MG)中加入500μl DMSO,配制成20%(w/v) DMSO母液。溶解过程需要在40-50℃加热20-30min。溶液室温保存,不用冷藏。如有结晶析出,可以重新加热后溶解,不影响使用。
C, 染色步骤
大多数实验体系中Calcein Blue, AM的工作浓度为2-5μM。由于不同细胞系的zuijia染色条件不同,初次实验建议做梯度实验,以确定Calcein Blue, AM的zuijia工作浓度,以zui低的探针浓度得到zuihao的荧光结果为筛选原则。
1) 取一管适量分装的储存液(1000×)置于室温,至少回温20min,低速离心后,用合适的缓冲液如PBS,HBSS-HEPES稀释到1×染色工作液。
【注意】:有时可添加一定量的非离子表面活性剂如Pluronic F127到Calcein Blue, AM储存液内来增强其水溶性。制备染色工作液前,取一管Calcein Blue, AM储存液内加入等体积的20% Pluronic F127,使Pluronic F127的终浓度为0.02%。加入Pluronic F127的Calcein Blue, AM溶液不可长期保存,需现配现用。
2) 对于贴壁细胞,先用yi酶-EDTA或Accutase消化细胞,离心收集细胞(1000 rpm,3min)。对于悬浮细胞,直接离心收集细胞。【注意】:贴壁细胞也可进行原位染色。
3) 去上清,用PBS(或者其他缓冲液)清洗细胞2~3次,以充分去除残留的酯酶活性。
4) 用1/10细胞培养基体积的Calcein Blue, AM染色工作液重悬细胞,37℃孵育20min~1h。
【注意】:1)若细胞自身含有机阴离子转运体,需加入丙huang舒(1-2.5mM)或者苯磺唑酮(0.1-0.25mM)到孵育体系内以降低去酯化的Calcein Blue泄露到胞外;2)降低探针加载温度,可能会减少探针区室化现象。
5) 用PBS(或者其他缓冲液)洗涤细胞两次去除多余染料。
【注意】:如有必要,使用含有机阴离子转运抑制剂的缓冲液来进行细胞清洗。
6) 用含合适滤光片(Ex/Em=360/445nm)的仪器进行检测。
相关产品
货号 | 名称 | 规格 | Ex/Em |
MX3011-50UG | Calcein AM, Ultra Pure Grade 钙黄绿素(绿色) | 50μg | 490/515nm |
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— —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】
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