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MX3230-20T-活性检测试剂盒细胞增殖

  • 产地
  • 所在地
  • China
  • 上海上海市

更新时间:2024-04-18

有效日期:还剩333

产品详情

Caspase-2 Activity Assay Kit (Fluorometric)

Caspase-2活性检测试剂盒(荧光法)



产品信息

产品名称

产品编号

规格

价格(元)

Caspase-2活性检测试剂盒(荧光法)

MX3230-20T

20T

930

Caspase-2活性检测试剂盒(荧光法)

MX3230-100T

100T

2980


产品描述

Caspases(Cysteine-requiring Aspartate Proteases)是一个高度保守的半胱an酸蛋白酶家族,特异性识别底物中的天冬氨酸残基,在介导细胞凋亡的过程中发挥着非常重要的作用。Caspases以潜在酶原的形式表达,通过自发蛋白分解机制或经其他蛋白酶(通常是其他caspases)加工处理的方式被活化。人caspases可细分为三大功能组:细胞因子活化(caspase-1,-4,-5和-13),凋亡启动(caspase-2,-8,-9和-10)和凋亡执行(caspase-3,-6和-7)。

Caspase-2(Caspase 2),也称为Nedd2、ICH-1,含核定位所依赖的长前肽结构域的一类caspase。一旦凋亡通路被激活,caspase酶原在Asp316位上被切割生成一个14kDa片段和一个32kDa的前肽结构域/大亚基。接下来在Asp152和Asp330被切割,进一步生成18kDa大亚基和12kDa小片段。Caspase-2是应对基因毒性应激或有丝分裂障碍的核凋亡反应物。一旦招募生成含p53诱导死亡结构域蛋白-PIDD的复合物,caspase 2被激活。因此,Caspase-2被认为是核启动caspase,并且在下游的凋亡途径中需要激活caspase-9和caspase-3。

Caspase-2活性检测试剂盒(荧光法)(Caspase-2 Activity Assay Kit, Fluorometric or Caspase-2 Fluorometric Assay Kit)以偶联上发色基团AFC的caspase-2序列特异性的多肽为底物。当底物被caspase-2剪切后,发色基团被释放出来,进而用荧光酶标仪来测定其荧光强度(激发波长=485nm,发射波长=535nm)。通过计算RFU凋亡诱导组/RFU阴性对照组的比值来确定凋亡诱导组caspase-2的活化程度。

本品适用于培养细胞以及新鲜组织的caspase-2活性检测。


产品包装

编号

组分名称

保存方法

货号(规格)

MX3230-20T

MX3230-100T

MX3230-A

Lysis Buffer 裂解缓冲液

2-8℃

5ml

20ml

MX3230-B

2× Reaction Buffer 2×反应缓冲液

2-8℃

2ml

10ml

MX3230-C

Caspase-2 Substrate Caspase-2底物

-20避光

6μl

30μl

MX3230-D

0.1M DTT

-20避光

60μl

250μl


保存与运输方法

保存:-20℃保存,1年有效。开盒后置Lysis Buffer和2× Reaction Buffer于2-8℃保存。Caspase-2 Substrate和0.1M DTT需要避光冻存。

运输:冰袋运输。


注意事项

1) Caspase-2 Substrate需避光保存和使用。

2) 某些凋亡诱导剂诱导的凋亡可能通过caspase-2非依赖的方式进行,此种情况使用本品检测的caspase-2活性无明显变化,则,需要考虑凋亡机制中的其他信号通路。

3) 起始细胞数量需达3~5×106个或新鲜组织量达50~100mg,以保证达到测定所需的100~200μg蛋白量。Caspase-2的活性与细胞裂解后的蛋白含量有关,如测定的RFU值偏低,可通过适当延长反应时间来操作。但如果测定的RFU值依然不高,则要通过增加细胞数量或组织量的方法来提高蛋白量。

4) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


使用方法

1. 需要的其他试剂和材料

仪器:低温高速离心机、荧光酶标仪、微量移液器、玻璃匀浆器(组织样本)

耗材:1.5ml微量离心管、白色或黑色(不透明、平底)的96孔酶标板

试剂:PBS、蛋白定量试剂(比如:Bradford法蛋白浓度测定试剂盒)、ddH2O


2. 试剂准备

2.1 Lysis Buffer(含DTT

于实验前,按每50μl Lysis Buffer 加入0.5μl DTT的比例准备足量的裂解工作液,置于4℃或冰上待用。

2.2 Reaction Buffer(含DTT

于使用前,按每50μl 2×Reaction Buffer 加入0.5μl DTT的比例准备足量的反应工作液。

2.3 Caspase-2 Substrate工作液

将Caspase-2 Substrate从冰箱内取出,置于室温(或25℃水浴)使其充分融化,低速离心使其沉至管底。于使用前,按照19.5μl 2×Reaction Buffer 加入0.5μl Caspase-2 Substrate的比例准备足量的Caspase-2 Substrate工作液。


3. 样本准备

3.1 细胞裂解

a)用合适方法诱导细胞凋亡,同时设立阴性对照组(不加诱导剂),收集3~5×106个细胞。

b)PBS洗涤细胞2次(2000rpm,离心5min),尽量吸尽PBS上清。

c)往离心的沉淀细胞中加入100μl预冷的Lysis Buffer(含DTT,吹打混匀。

d)置冰上裂解20~60min,其间涡旋振荡3~4次,每次10s;或冻融2~3次。

e)4℃,10,000rpm离心1min。

f)小心吸取上清(含裂解释放的蛋白质)转移到新的EP管内,置于冰上待用。

g)取少量上清(1~2μl),用常规方法(Bradford法)测定蛋白浓度。

3.2 组织裂解

a)取50~100mg组织置于培养皿内,用手术剪剪碎成3mm×3mm左右的小块,加入150~200μl预冷的Lysis Buffer(含DTT,用玻璃匀浆器上下手动匀浆15次,注意低温操作。

b)将组织匀浆液转移到1.5ml预冷的离心管,10,000rpm,4℃离心5min。

c)小心吸取上清(含裂解释放的蛋白质)转移到新的EP管内,置于冰上待用。

d)取少量上清(1~2μl),用常规方法(Bradford法)测定蛋白浓度。

4. Caspase-2活性检测

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上海懋康生物科技有限公司

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商家概况

主营产品:
特美汀,金担子素A ,潮霉素B,草铵膦,杀稻瘟菌素,嘌呤霉素,硫酸诺尔斯菌素,D-荧光素,雷帕霉素,独脚金内酯,果胶酶Y-23,纤维素酶R-10,离析酶R-10,STZ,链脲佐菌素,
公司性质:
生产厂家

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