RNA恒温扩增试剂盒（液体基础型）

RNA恒温快速扩增试剂盒（液体基础型）使用说明书

【产品名称】

通用名称：RNA恒温快速扩增试剂盒（液体基础型）

【包装规格】

货号：WLRB5001

规格：100T

【原理概述】

本试剂盒基于一种常温恒温核酸快速扩增技术：在恒温条件下（42℃），特殊修饰的反转录酶利用特异性引物和模板RNA合成cDNA链，反应体系中的重组酶、单链DNA结合蛋白和DNA聚合酶以新合成的cDNA链为模板进行快速核酸扩增反应。适用于实验室级别的RNA扩增以及其他检测用途的RNA样本扩增使用。

【引物设计】

建议使用长度在30-35 bp的引物，引物过短会影响扩增速度和检测灵敏度；引物设计避免形成二级结构而影响扩增；扩增子长度建议在150-300 bp，通常不超过500 bp。

【产品特点】

本试剂盒具有灵敏度高、特异性强、反应时间短（仅需30 min）等优点。

金属浴、水浴锅等即可进行反应操作，无需购买PCR扩增仪等价格高昂的设备。

【试剂盒组成】

【试剂盒储存】

1．运输温度：≤ 20 ºC的恒温环境；

2．储存条件：储存温度 ≤ -20 °C的恒温环境，避光保存，避免重压、反复冻融；

3．产品有效期：6个月；

4．生产日期见外包装。

【操作步骤】

提前将试剂盒所需组分取出，冰上或低温下融化（C buffer可室温融化），震荡混匀。

(1) 向无菌0.2 mL PCR管中加入20 μL C buffer、5 μL L buffer；

(2) 加入2 μL上游引物、2 μL下游引物；

(3) 加入1.5 μL dNTPs；

(4) 向反应管中加入12 μL PR-core（步骤1~4可以混合后再分装至反应管中）；

(5) 向反应管中加入2 μL ~ 5 μL核酸模板（可根据实际需求调整加入模板的体积，并相应调整加入的ddH2O体积，至模板与ddH2O总体积为5 μL）；

(6) 最后向反应管中加入2.5 μL B buffer并充分混合（加入B buffer反应立即被启动），请务必上下颠倒甩动反应管8-10次进行混匀；对于多个反应，建议提前将B buffer加至反应管的盖子内侧，盖上盖后上下颠倒后混匀；

(7) 混匀后将反应液甩（或快速离心）至管子底部，立即将反应管放入恒温设备中：42 ºC恒温孵育，时间30 min；

(8) 反应结束后，加入50 μL Tris饱和酚/氯仿/异戊醇（25:24:1）抽提液，1:1抽提反应液，混匀，12000 rpm离心5 min，取5 μL上清进行琼脂糖凝胶电泳检测。

体系配制

【注意事项】

1. 由为保证液体试剂组分活性，请保证储存温度 ≤ -20 ºC；试剂使用时请保持低温，避免高温放置过长时间；

在进行反应时请注意避免微量核酸染，并设置空白对照实验组。