EZI011RK-EZ-Tn5™ <R6K y ori / KAN-2> Insertion Kit

名称： EZ-Tn5™ <R6K y ori / KAN-2> Insertion Kit
货号： EZI011RK
单位： 10 Rxns
储藏温度：-20℃
供应商：上海古朵生物

EZ-Tn5™ <R6Kγori/KAN-2> Insertion Kit
应用：
营救质粒或其他环状DNA(如线粒体DNA)，这种DNA不能在大肠菌中复制，因为缺少了复制位点或选择标记。
从转座子插入克隆中制备DNA测序模板，不需要步移引物或额外的亚克隆步骤
创建一个体外的随机基因敲除文库，更有利于质粒编码基因的遗传分析
EZ-Tn5™ <R6Kγori/KAN-2> Insertion Kit 有助于测序和一些不能在大肠菌中复制的质粒及环状DNA的基因分析。盒子是在EZ-Tn5™ <R6Kγori/KAN-2>基础上构建的，含有大肠菌R6Kγ条件复制子和一个卡那霉素标记。一个简单的一步2小时的体外反应，便可以实现随机插入转座子到靶DNA。将其转化大肠菌表达pir基因，这是R6Kγori复制所需要的产物，插入的克隆可在卡那霉素平板上选择，并可使用提供的引物进行双向测序的，克隆可以在Epicentre's TransforMax™ EC100D™ pir+ 或TransforMax™ EC100D™ pir-116 菌株中保存。

图1，含有EZ-Tn5™ <R6Kγori/KAN-2>转座子的质粒在TransforMax™ EC100D™ pir+ 菌株中，每个细胞有15个拷贝（1-4泳道），在TransforMax™ EC100D™ pir-116细胞中，每个细胞含有250个拷贝（5-8泳道）。随机选择的克隆使用the Colony Fast-Screen™ Kit处理。每泳道上样量5微升。M，超螺旋DNA梯状条带。