NovaBios-非洲安哥拉的黄热病快速检测试纸

美国NovaBios 非洲安哥拉的黄热病快速检测试纸

广州健仑生物科技有限公司

本公司专业供应各种进口品牌黄热病检测试剂盒，包括美国的NovaBios、广州创仑等CDC品牌。主要包括胶体金、酶免、PCR等方法学。欢迎咨询

黄热病毒IgM、IgG、ELISA检测试剂、黄热病快速检测试剂盒、

黄热病毒核酸检测试剂盒（荧光探针PCR）

非洲安哥拉工作、旅游黄热病检测试剂盒

美国CDC的黄热病毒诊断试剂——美国的NovaBios

美国NovaBios 非洲安哥拉的黄热病快速检测试纸

【黄热病简介】
黄热病，历*称为黄色杰克，黄色瘟疫或青铜约翰，是一种急性病毒性疾病。在大多数情况下，症状包括发热，寒战，食欲不振，特别是在背部的肌肉痛，和头痛。症状通常在五天内改善。在一些人在一天内改善，发烧回来，腹痛发生，肝损伤开始导致黄色皮肤。如果发生这种情况，出血和肾脏问题的风险也增加。

【检测原理】
96孔板YFV-IgM/IgG特异性抗原。将对照或测试样品加入到合适的孔中并孵育。用洗涤缓冲液洗去游离组分。将HRP缀合的检测试剂加入到孔中。TMB底物用于显现HRP酶反应。TMB由HRP催化以产生在加入酸性停止溶液后变为黄色的蓝色产物。黄色的密度与板中捕获的样品的YFV-IgM/IgG量成比例。外径在微板读数器中在450nm下通过分光亮度计测量吸亮度，然后可以计算YFV-IgM/IgG的浓度。

产品规格：96T/盒
检测范围：定性
灵敏度：定性
储存和使用期：2-8℃ 储存12个月
产品应用：用于定性检测人血清，血浆，细胞培养上清液或任何生物液体中的YFV-IgM。

【套件组件】
1.一个96孔板预涂
2.阳性对照：0.5ml
3.阴性对照：0.5ml
4.洗涤缓冲液（30×）：20 ml。稀释：1:30
5.样品稀释缓冲液：6ml
6.6HRP酶联试剂（RTU）：6ml
7.终止液：6ml
8.TMB底物：6ml
9.TMB底物B：6ml
10.板密封：2
11.密封袋：1

【需要材料但不提供】
1.37℃培养箱
2.酶标仪（波长：450nm）
3.精确的移液器和一次性移液器吸头
4.自动洗板机
5.ELISA振荡器
1.5ml管
7.板盖
8.吸收滤纸
9.100ml和1L体积量筒。

【操作程序】
A.制备样品和试剂
1. 样品
收集并立即分析测试样品（2小时内）后立即分离。或等分并长期储存在-20°C。避免多个冻融循环。
细胞培养上清：以约2000-3000×rpm离心20分钟，以去除沉淀，立即分析或分装，并储存于-20℃。
血清：在室温下凝结血清（约4小时）。以约2000-3000×rpm离心20分钟。立即分析血清或等分，并储存在-20°C。
血浆：用柠檬酸盐或EDTA作为抗凝剂收集血浆。在收集30分钟内以2000-3000×rpm离心20分钟。立即分析或等分，并存储在-20°C冷冻。
尿：在无菌容器中收集，以2000-3000×rpm离心20分钟。立即分析或等分，并存储在-20°C冷冻。
组织：组织匀浆的制备将根据组织类型而变化。收集和冲洗样品在2-4℃下用PBS（Ph 7.4）。称重样品并用PBS（Ph 7.4）匀化，并对细胞悬浮液进行超声处理。以2000-3000×rpm离心20分钟。立即测定或等分并储存在-80℃。
（注意：1.*凝结血液样品，离心，避免溶血和沈淀。   2.NaN3不能用作试验样品防腐剂，因为它抑制HRP。）

2.洗涤缓冲液
用蒸馏水稀释浓缩洗涤缓冲液30倍（1/30）（即将20ml浓缩洗涤缓冲液加入580ml蒸馏水中）。

B.测定程序
在使用前将试剂盒组分和样品平衡至室温。建议绘制每个测试的标准曲线。
1.在预涂板上分别设置阳性/阴性，测试样品和对照（零）孔，并记录它们的位置。
2.将50μl的阴性和阳性对照等分到设定的孔中。
3.向对照（零）孔中加入50μl样品稀释缓冲液。
4.向测试样品孔中加入50μl适当稀释的样品（样品稀释比例：1：5）。在底部加入溶液而不接触侧壁。摇动平板以混合内容物。
5.用盖子密封板，并在37℃孵育30分钟。
6.取下盖子并通过在吸收性滤纸或其他吸收材料上敲击板来丢弃板内容物。
7.弃去溶液，用洗涤缓冲液洗涤板5次。不要让孔在任何时候*干燥。
手动清洗：丢弃溶液，不要接触侧壁。将吸水滤纸或其他吸收材料上拍出液体。将洗涤缓冲液填满每个孔，并在ELISA振荡器上轻轻涡流2 分钟。丢弃内容物，并将吸收性滤纸或其他吸收材料上的板敲打。洗板五次。
自动洗涤：弃去所有孔中的溶液，并用洗涤缓冲液洗涤板5次（用缓冲液过量填满孔）。在zui后的洗涤之后，翻转该板并敲击吸收性滤纸或其它吸收材料。建议将清洗器设置为1分钟的浸泡时间。
8.向每个孔中加入50μlHRP结合物的试剂（对照孔除外）。在每个孔底部加入溶液，不要接触侧壁。
9.用盖子密封板，并在37℃孵育30分钟。
10.取下盖子，用洗涤缓冲液洗板5次。
11.向每个孔中加入50μlTMB底物A和50μlTMB底物B，盖上平板并在37℃下孵育15分钟。避免暴露于光。
12.向每个孔中加入50μl终止液，充分混匀。颜色应立即变为黄色。
13.阅读O.D.在微板读数器中在450nm的吸亮度在加入终止溶液的15分钟内。对于计算，（相对O.D.450）=（每个孔的O.D.450） - （零阱的O.D.450）。标准曲线可以作为每种标准溶液（Y）的相对O.D.450与标准溶液（X）的相应浓度作图。可以从标准曲线插入样品的人类YFV-IgM浓度。
14.注意：如果稀释样品，稀释倍数乘以内插法得到稀释前的浓度。

C.结果确定
1.试验有效性：阳性对照的平均值≥1.00; 阴性对照的平均值≤0.10。
2.临界值（CUT OFF）计算：临界值=负控制的平均值+0.15
3.阴性结果：如果OD值<CUT OFF，样品为人YFV-IgM阴性。
4.阳性结果：如果OD值≥CUTOFF，样品为人类YFV-IgM阳性。

D.注意事项
1.在实验之前，离心每个试剂盒组分数分钟，将所有试剂倒入试管底部。
2.在混合或重新组装部件时避免起泡或气泡。
3.洗涤缓冲液可结晶并分离。如果发生这种情况，请加热管以溶解。
4.建议每个对照和样品一式两份或重复测量三次。
5.不要让板在任何时候*干燥！这可以使板上的生物材料失活。
6.不要重复使用移液器吸头和管，以避免交叉污染。
7.不要使用不同套件中过期的组件或组件。
8.将TMB底物B储存在黑暗中，并且为了避免板温育对于温度差的边缘效应，建议在使用前在室温下使TMB底物平衡30分钟。用灭菌的吸头抽吸所需的剂量，不要将残留溶液倒回到小瓶中。

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四、临床表现
　　潜伏期为3-6天。
　　本病临床表现差异很大，病情可从轻度自限性到致死黄热病染。典型临床过程可分为以下4期。
　　（一）病毒血症期。
　　急性起病，寒战、发热，可达39-40℃，相对缓脉。剧烈头痛、背痛、全身肌肉痛，黄热病、呕吐。结膜和面部充血，鼻衄，上腹不适，压痛明显。小便色深，可有蛋白尿。症状持续3-5天。
　　（二）缓解期。 
　　感染期发病的3-5天后出现12-24小时的缓解期，表现为体温下降，头痛消黄热病，全身基本状况改善。此期体内病毒被清除，血中可以查到非感染性免疫复合物。轻度患者在此期可以*。
　　（三）肝肾损伤期。
　　此期持续3-8天，约15-25％患者自缓解期后进入此期。体温再次升高，全身症状重新出现，频繁呕吐，上腹痛等。出现黄疸并逐渐加深，出血表现如瘀点、瘀斑、鼻衄、粘膜广泛出血，甚至腔道大出血。肾功能异常，尿量减少，蛋白尿。心脏损害心电图可见ST-T段异常，少数可出现急性心肌扩张。可出现脑水肿，脑脊液蛋白升高但白细胞不高。高血压，心动过速，休克，顽固性呃逆提示预后不良。
　　此期患者约有20-50％在发病后的7-10天死亡。
　　（四）恢复期。
　　此期患者极度疲乏虚弱，可持续2-4周。也有报道患者在恢复期死亡，部分是由于心律黄热病常。转氨酶升高可持续至恢复后数月。
　　五、实验室检查
　　（一）一般检查。
　　血常规：外周血白细胞减少，中性粒细胞比例减少，但血小板正常。
　　尿常规：蛋白尿，并有颗粒管型及红细胞。
　　粪便检查：大便隐血试验可阳性。
　　生化检查：血清转氨酶可升高。血清胆红素升高，重者达15-20 mg/dl（255-340 μmol/L）,肝、肾功能异常。严重时可伴有低血糖。
　　凝血酶原时间延长。部分病例有DIC表现。
　　（二）血清学检查。 
　　由于黄病毒之间存在抗原黄热病叉，在进行血清学实验时应设立适当的对照，要慎重解释实验结果。
　　1. 血清特异性IgM抗体：采用ELISA、免疫荧光等方法检测，捕获法检测IgM抗体的结果较为可靠。一般发病后第5-7天出现IgM抗体。
　　2. 血清特异性IgG抗体：采用ELISA、免疫荧光抗体测定（IFA）、免疫层析等方法检测。患者恢复期血清 IgG 抗体滴度较急性期呈 4 倍以上升高

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Fourth, clinical manifestations
The incubation period is 3-6 days.
The clinical manifestations of this disease is very different, the disease can be mild from the limit to the death of yellow fever. Typical clinical processes can be divided into the following four periods.
(A) virens.
Acute onset, chills, fever, up to 39-40 ℃, relative slow pulse. Severe headache, back pain, whole body muscle pain, yellow fever, vomiting. Conjunctiva and facial congestion, epistaxis, epigastric discomfort, tenderness significantly. Urine color depth, may have proteinuria. Symptoms last for 3-5 days.
(B) the remission period.
Infection period of 3-5 days after the onset of 12-24 hours of remission, manifested as decreased body temperature, headache, loss of yellow fever, the basic condition of the body improved. This period of the virus was cleared, the blood can be found in non-infectious immune complex. Mild patients in this period can be cured.
(C) liver and kidney injury period.
This period lasts 3-8 days, about 15-25% of patients after the remission period into this period. Body temperature rise again, systemic symptoms re-emergence, frequent vomiting, abdominal pain and so on. Appear jaundice and gradually deepened, bleeding performance such as petechia, ecchymosis, epistaxis, mucosal extensive bleeding, and even cavity bleeding. Renal dysfunction, reduced urine output, proteinuria. Heart damage ECG visible ST-T segment abnormalities, a few may appear acute myocardial dilatation. There may be cerebral edema, elevated cerebrospinal fluid protein but not high. Hypertension, tachycardia, shock, intractable hiccups suggest poor prognosis.
About 20-50% of patients died 7-10 days after the onset of this disease.
(D) recovery period.
This period of patients with extreme fatigue weak, sustainable for 2-4 weeks. There are also reports of death in patients with convalescence, partly due to rhythm of yellow fever often. Elevated transaminases can last until months after recovery.
5, laboratory inspection
(A) general inspection.
Blood routine: peripheral white blood cells, neutrophils decreased, but the normal plaets.
Urine routine: proteinuria, and granular tube and red blood cells.
Fecal examination: fecal occult blood test can be positive.
Biochemical examination: serum transaminase can be increased. Serum bilirubin increased, severe cases of 15-20 mg / dl (255-340 μmol / L), liver and kidney dysfunction. Severe may be associated with hypoglycemia.
Prothrombin time is prolonged. Some cases have DIC performance.
(B) serological examination.
Because of the presence of antigenic yellow fever between the yellow virus fork, in the serological experiments should be set up appropriate control, to carefully explain the experimental results.
1. Serum-specific IgM antibody: ELISA, immunofluorescence and other methods to detect, capture the detection of IgM antibody results are more reliable. IgM antibodies appear on days 5-7 after onset.
2. Serum specific IgG antibody: ELISA, immunofluorescence antibody assay (IFA), immunochromatography and other methods. Patients with convalescent serum IgG antibody titer than the acute phase was more than 4 times higher