NovaBios-黄热病毒IGG/IGM抗体ELISA检测试剂盒

美国NovaBios 黄热病毒IGG/IGM抗体ELISA检测试剂盒

广州健仑生物科技有限公司

本公司专业供应各种进口品牌黄热病检测试剂盒，包括美国的NovaBios、广州创仑等CDC品牌。主要包括胶体金、酶免、PCR等方法学。欢迎咨询

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黄热病毒核酸检测试剂盒（荧光探针PCR）

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美国CDC的黄热病毒诊断试剂——美国的NovaBios

美国NovaBios 黄热病毒IGG/IGM抗体ELISA检测试剂盒

【黄热病简介】
黄热病，历*称为黄色杰克，黄色瘟疫或青铜约翰，是一种急性病毒性疾病。在大多数情况下，症状包括发热，寒战，食欲不振，特别是在背部的肌肉痛，和头痛。症状通常在五天内改善。在一些人在一天内改善，发烧回来，腹痛发生，肝损伤开始导致黄色皮肤。如果发生这种情况，出血和肾脏问题的风险也增加。

【检测原理】
96孔板YFV-IgM/IgG特异性抗原。将对照或测试样品加入到合适的孔中并孵育。用洗涤缓冲液洗去游离组分。将HRP缀合的检测试剂加入到孔中。TMB底物用于显现HRP酶反应。TMB由HRP催化以产生在加入酸性停止溶液后变为黄色的蓝色产物。黄色的密度与板中捕获的样品的YFV-IgM/IgG量成比例。外径在微板读数器中在450nm下通过分光亮度计测量吸亮度，然后可以计算YFV-IgM/IgG的浓度。

产品规格：96T/盒
检测范围：定性
灵敏度：定性
储存和使用期：2-8℃ 储存12个月
产品应用：用于定性检测人血清，血浆，细胞培养上清液或任何生物液体中的YFV-IgM。

【套件组件】
1.一个96孔板预涂
2.阳性对照：0.5ml
3.阴性对照：0.5ml
4.洗涤缓冲液（30×）：20 ml。稀释：1:30
5.样品稀释缓冲液：6ml
6.6HRP酶联试剂（RTU）：6ml
7.终止液：6ml
8.TMB底物：6ml
9.TMB底物B：6ml
10.板密封：2
11.密封袋：1

【需要材料但不提供】
1.37℃培养箱
2.酶标仪（波长：450nm）
3.精确的移液器和一次性移液器吸头
4.自动洗板机
5.ELISA振荡器
1.5ml管
7.板盖
8.吸收滤纸
9.100ml和1L体积量筒。

【操作程序】
A.制备样品和试剂
1. 样品
收集并立即分析测试样品（2小时内）后立即分离。或等分并长期储存在-20°C。避免多个冻融循环。
细胞培养上清：以约2000-3000×rpm离心20分钟，以去除沉淀，立即分析或分装，并储存于-20℃。
血清：在室温下凝结血清（约4小时）。以约2000-3000×rpm离心20分钟。立即分析血清或等分，并储存在-20°C。
血浆：用柠檬酸盐或EDTA作为抗凝剂收集血浆。在收集30分钟内以2000-3000×rpm离心20分钟。立即分析或等分，并存储在-20°C冷冻。
尿：在无菌容器中收集，以2000-3000×rpm离心20分钟。立即分析或等分，并存储在-20°C冷冻。
组织：组织匀浆的制备将根据组织类型而变化。收集和冲洗样品在2-4℃下用PBS（Ph 7.4）。称重样品并用PBS（Ph 7.4）匀化，并对细胞悬浮液进行超声处理。以2000-3000×rpm离心20分钟。立即测定或等分并储存在-80℃。
（注意：1.*凝结血液样品，离心，避免溶血和沈淀。   2.NaN3不能用作试验样品防腐剂，因为它抑制HRP。）

2.洗涤缓冲液
用蒸馏水稀释浓缩洗涤缓冲液30倍（1/30）（即将20ml浓缩洗涤缓冲液加入580ml蒸馏水中）。

B.测定程序
在使用前将试剂盒组分和样品平衡至室温。建议绘制每个测试的标准曲线。
1.在预涂板上分别设置阳性/阴性，测试样品和对照（零）孔，并记录它们的位置。
2.将50μl的阴性和阳性对照等分到设定的孔中。
3.向对照（零）孔中加入50μl样品稀释缓冲液。
4.向测试样品孔中加入50μl适当稀释的样品（样品稀释比例：1：5）。在底部加入溶液而不接触侧壁。摇动平板以混合内容物。
5.用盖子密封板，并在37℃孵育30分钟。
6.取下盖子并通过在吸收性滤纸或其他吸收材料上敲击板来丢弃板内容物。
7.弃去溶液，用洗涤缓冲液洗涤板5次。不要让孔在任何时候*干燥。
手动清洗：丢弃溶液，不要接触侧壁。将吸水滤纸或其他吸收材料上拍出液体。将洗涤缓冲液填满每个孔，并在ELISA振荡器上轻轻涡流2 分钟。丢弃内容物，并将吸收性滤纸或其他吸收材料上的板敲打。洗板五次。
自动洗涤：弃去所有孔中的溶液，并用洗涤缓冲液洗涤板5次（用缓冲液过量填满孔）。在zui后的洗涤之后，翻转该板并敲击吸收性滤纸或其它吸收材料。建议将清洗器设置为1分钟的浸泡时间。
8.向每个孔中加入50μlHRP结合物的试剂（对照孔除外）。在每个孔底部加入溶液，不要接触侧壁。
9.用盖子密封板，并在37℃孵育30分钟。
10.取下盖子，用洗涤缓冲液洗板5次。
11.向每个孔中加入50μlTMB底物A和50μlTMB底物B，盖上平板并在37℃下孵育15分钟。避免暴露于光。
12.向每个孔中加入50μl终止液，充分混匀。颜色应立即变为黄色。
13.阅读O.D.在微板读数器中在450nm的吸亮度在加入终止溶液的15分钟内。对于计算，（相对O.D.450）=（每个孔的O.D.450） - （零阱的O.D.450）。标准曲线可以作为每种标准溶液（Y）的相对O.D.450与标准溶液（X）的相应浓度作图。可以从标准曲线插入样品的人类YFV-IgM浓度。
14.注意：如果稀释样品，稀释倍数乘以内插法得到稀释前的浓度。

C.结果确定
1.试验有效性：阳性对照的平均值≥1.00; 阴性对照的平均值≤0.10。
2.临界值（CUT OFF）计算：临界值=负控制的平均值+0.15
3.阴性结果：如果OD值<CUT OFF，样品为人YFV-IgM阴性。
4.阳性结果：如果OD值≥CUTOFF，样品为人类YFV-IgM阳性。

D.注意事项
1.在实验之前，离心每个试剂盒组分数分钟，将所有试剂倒入试管底部。
2.在混合或重新组装部件时避免起泡或气泡。
3.洗涤缓冲液可结晶并分离。如果发生这种情况，请加热管以溶解。
4.建议每个对照和样品一式两份或重复测量三次。
5.不要让板在任何时候*干燥！这可以使板上的生物材料失活。
6.不要重复使用移液器吸头和管，以避免交叉污染。
7.不要使用不同套件中过期的组件或组件。
8.将TMB底物B储存在黑暗中，并且为了避免板温育对于温度差的边缘效应，建议在使用前在室温下使TMB底物平衡30分钟。用灭菌的吸头抽吸所需的剂量，不要将残留溶液倒回到小瓶中。

美国NovaBios 黄热病毒IGG/IGM抗体ELISA检测试剂盒

艾滋病毒感染 - 黄热病疫苗禁用于艾滋病或其他临床表现艾滋病毒的人群，包括CD4T淋巴细胞值<200 / mm3或<6岁儿童总淋巴细胞的<15％的人群。这项建议是基于这个人群脑炎的潜在风险增加的。
如果由CD4计数（<200 / mm3或<6岁儿童的总淋巴细胞<15％）或有症状的艾滋病毒感染者的严重免疫抑制者无法避免前往黄热病流行地区，医疗豁免应为应该强调提供防治蚊子叮咬措施的咨询服务。对于其他不符合上述标准的感染艾滋病毒的人员，请参阅以下部分“注意事项”。
免疫缺陷（除胸腺疾病或HIV感染之外） - 黄热病疫苗禁用于原发性免疫缺陷患者，以及恶性肿瘤或移植可能与通过治疗或潜在病症引起的免疫抑制相关的免疫缺陷。虽然没有关于这些人使用黄热病疫苗的数据，但是他们可能会因黄热病疫苗相关的严重不良事件而增加风险（见第8章免疫受损旅客）。如果患有免疫缺陷病毒的人不能避免前往黄热病流行地区，应提供医疗豁免，并强调对蚊子叮咬采取保护措施的咨询服务。
免疫抑制和免疫调节治疗 - 黄热病疫苗禁用于免疫反应被目前或zui近的放射治疗或药物抑制或调节的人群。具有已知免疫抑制或免疫调节特性的药物包括但不限于高剂量全身性皮质类固醇，烷化剂，抗代谢物，肿瘤坏死因子-α抑制剂（如依那西普），白细胞介素-1和白细胞介素-6阻断剂（如阿尼金拉和托珠珠单抗）或靶向免疫细胞的其他单克隆抗体（如利妥昔单抗或阿仑单抗）。在接受这些疗法的人中没有使用黄热病疫苗的具体数据。然而，这些人被认为在与黄热病疫苗相关的严重不良事件的风险增加，并且减毒疫苗的使用在大多数这些疗法的包装插入物中是禁忌的（参见第8章免疫受损的旅行者）。
活的病毒疫苗应该推迟到已经停用这些疗法的人，直到免疫功能得到改善。如果接受免疫抑制或免疫调节治疗的人员不能避免前往黄热病流行地区，那么应该提供医疗豁免，并强调有关蚊子叮咬的保护措施的咨询。
免疫状态改变的家庭成员本身没有禁忌症，可以接受黄热病疫苗。
注意事项
婴儿6-8个月
6-8个月是黄热病疫苗接种的预防措施。在6-8个月的婴儿中报告了两例YEL-AND。在6个月龄以下的婴儿中，YEL-AND的比例升高（50?400 / 100,000）。 9个月以前，YEL-AND的风险被认为是显着降低。 ACIP一般建议，只要有可能，旅行到黄热病流行国家应该推迟或避免6-8个月的儿童。如果旅行是不可避免的，是否对这些婴儿进行疫苗接种的决定需要平衡YFV暴露的风险与接种后不良事件的风险。

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我司还提供其它进口或国产试剂盒：登革热、疟疾、乙脑、寨卡、黄热病、基孔肯雅热、克锥虫病、违禁品滥用、肺炎球菌、军团菌等试剂盒以及日本生研细菌分型诊断血清、德国SiFin诊断血清、丹麦SSI诊断血清等产品。

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HIV infection - Yellow fever vaccine is contraindicated in people with HIV or other clinical manifestations of HIV, including <15% of people with CD4 T lymphocyte values ​​<200 / mm3 or <6 years old children with total lymphocytes. This recommendation is based on the increased risk of encephalitis in this population.
If a severe immunosuppressive person with a CD4 count (<200% or <6 years old total lymphocyte <15%) or a symptomatic HIV infection can not avoid going to a yellow fever epidemic area, the medical exemption should be emphasized Provide advice on the prevention and control of mosquito bites. For other people who do not meet the above criteria for HIV infection, please refer to the following section "Precautions".
Immunodeficiency (except thymic disease or HIV infection) - Yellow fever vaccine is contraindicated in patients with primary immunodeficiency, and malignancies or transplantation may be associated with immunodeficiency associated with immunosuppression caused by treatment or underlying illness. Although there is no data on the use of yellow fever in these people, they may be at increased risk due to serious adverse events associated with yellow fever (see Chapter 8, impaired immunocompetent travelers). If a person with an immunodeficiency virus can not avoid going to a yellow fever epidemic area, a medical exemption should be provided and an advisory service on protective measures for mosquito bites should be emphasized.
Immunosuppressive and immunomodulatory therapy - yellow fever vaccine is contraindicated in the immune response by current or recent radiotherapy or drug suppression or regulation of the population. Drugs with known immunosuppressive or immunomodulatory properties include, but are not limited to, high doses of systemic corticosteroids, alkylating agents, antimetabolites, tumor necrosis factor- [alpha] inhibitors (e.g., etanercept), interleukin- And interleukin-6 blockers (such as anhenira and pearl monoclonal antibody) or other monoclonal antibodies targeting immunocytes (such as rituximab or alemtuzumab). There was no specific data on the use of yellow fever vaccine in those who received these therapies. However, these people are considered to have increased risk of serious adverse events associated with yellow fever vaccines and the use of attenuated vaccines is contraindicated in most of these therapeutic packaging inserts (see Chapter 8 Immune-impaired travel By).
Live virus vaccines should be postponed to those who have discontinued these treatments until the immune function is improved. If immunosuppressive or immunomodulatory treatment can not be prevented from traveling to yellow fever epidemic areas, medical exemptions should be provided and counseling on protective measures for mosquito bites should be emphasized.
Immune status changes in the family members themselves are not contraindicated, can accept yellow fever vaccine.
Precautions
Baby 6-8 months
6-8 months is the prevention of yellow fever vaccination. Two cases of YEL-AND were reported in infants aged 6-8 months. In infants younger than 6 months of age, the proportion of YEL-AND increased (50-400 / 100,000). 9 months ago, the risk of YEL-AND was considered to be significantly reduced. ACIP generally recommends that, as soon as possible, travel to yellow fever epidemic countries should postpone or avoid children for 6-8 months. If travel is unavoidable, the decision to vaccinate these infants needs to balance the risk of YFV exposure and the risk of adverse events after vaccination.