NovaBios-黄热病毒抗原ELISA检测试剂盒

美国NovaBios 黄热病毒抗原ELISA检测试剂盒

广州健仑生物科技有限公司

本公司专业供应各种进口品牌黄热病检测试剂盒，包括美国的NovaBios、广州创仑等CDC品牌。主要包括胶体金、酶免、PCR等方法学。欢迎咨询

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黄热病毒核酸检测试剂盒（荧光探针PCR）

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美国CDC的黄热病毒诊断试剂——美国的NovaBios

美国NovaBios 黄热病毒抗原ELISA检测试剂盒

【黄热病简介】
黄热病，历*称为黄色杰克，黄色瘟疫或青铜约翰，是一种急性病毒性疾病。在大多数情况下，症状包括发热，寒战，食欲不振，特别是在背部的肌肉痛，和头痛。症状通常在五天内改善。在一些人在一天内改善，发烧回来，腹痛发生，肝损伤开始导致黄色皮肤。如果发生这种情况，出血和肾脏问题的风险也增加。

【检测原理】
96孔板YFV-IgM/IgG特异性抗原。将对照或测试样品加入到合适的孔中并孵育。用洗涤缓冲液洗去游离组分。将HRP缀合的检测试剂加入到孔中。TMB底物用于显现HRP酶反应。TMB由HRP催化以产生在加入酸性停止溶液后变为黄色的蓝色产物。黄色的密度与板中捕获的样品的YFV-IgM/IgG量成比例。外径在微板读数器中在450nm下通过分光亮度计测量吸亮度，然后可以计算YFV-IgM/IgG的浓度。

产品规格：96T/盒
检测范围：定性
灵敏度：定性
储存和使用期：2-8℃ 储存12个月
产品应用：用于定性检测人血清，血浆，细胞培养上清液或任何生物液体中的YFV-IgM。

【套件组件】
1.一个96孔板预涂
2.阳性对照：0.5ml
3.阴性对照：0.5ml
4.洗涤缓冲液（30×）：20 ml。稀释：1:30
5.样品稀释缓冲液：6ml
6.6HRP酶联试剂（RTU）：6ml
7.终止液：6ml
8.TMB底物：6ml
9.TMB底物B：6ml
10.板密封：2
11.密封袋：1

【需要材料但不提供】
1.37℃培养箱
2.酶标仪（波长：450nm）
3.精确的移液器和一次性移液器吸头
4.自动洗板机
5.ELISA振荡器
1.5ml管
7.板盖
8.吸收滤纸
9.100ml和1L体积量筒。

【操作程序】
A.制备样品和试剂
1. 样品
收集并立即分析测试样品（2小时内）后立即分离。或等分并长期储存在-20°C。避免多个冻融循环。
细胞培养上清：以约2000-3000×rpm离心20分钟，以去除沉淀，立即分析或分装，并储存于-20℃。
血清：在室温下凝结血清（约4小时）。以约2000-3000×rpm离心20分钟。立即分析血清或等分，并储存在-20°C。
血浆：用柠檬酸盐或EDTA作为抗凝剂收集血浆。在收集30分钟内以2000-3000×rpm离心20分钟。立即分析或等分，并存储在-20°C冷冻。
尿：在无菌容器中收集，以2000-3000×rpm离心20分钟。立即分析或等分，并存储在-20°C冷冻。
组织：组织匀浆的制备将根据组织类型而变化。收集和冲洗样品在2-4℃下用PBS（Ph 7.4）。称重样品并用PBS（Ph 7.4）匀化，并对细胞悬浮液进行超声处理。以2000-3000×rpm离心20分钟。立即测定或等分并储存在-80℃。
（注意：1.*凝结血液样品，离心，避免溶血和沈淀。   2.NaN3不能用作试验样品防腐剂，因为它抑制HRP。）

2.洗涤缓冲液
用蒸馏水稀释浓缩洗涤缓冲液30倍（1/30）（即将20ml浓缩洗涤缓冲液加入580ml蒸馏水中）。

B.测定程序
在使用前将试剂盒组分和样品平衡至室温。建议绘制每个测试的标准曲线。
1.在预涂板上分别设置阳性/阴性，测试样品和对照（零）孔，并记录它们的位置。
2.将50μl的阴性和阳性对照等分到设定的孔中。
3.向对照（零）孔中加入50μl样品稀释缓冲液。
4.向测试样品孔中加入50μl适当稀释的样品（样品稀释比例：1：5）。在底部加入溶液而不接触侧壁。摇动平板以混合内容物。
5.用盖子密封板，并在37℃孵育30分钟。
6.取下盖子并通过在吸收性滤纸或其他吸收材料上敲击板来丢弃板内容物。
7.弃去溶液，用洗涤缓冲液洗涤板5次。不要让孔在任何时候*干燥。
手动清洗：丢弃溶液，不要接触侧壁。将吸水滤纸或其他吸收材料上拍出液体。将洗涤缓冲液填满每个孔，并在ELISA振荡器上轻轻涡流2 分钟。丢弃内容物，并将吸收性滤纸或其他吸收材料上的板敲打。洗板五次。
自动洗涤：弃去所有孔中的溶液，并用洗涤缓冲液洗涤板5次（用缓冲液过量填满孔）。在zui后的洗涤之后，翻转该板并敲击吸收性滤纸或其它吸收材料。建议将清洗器设置为1分钟的浸泡时间。
8.向每个孔中加入50μlHRP结合物的试剂（对照孔除外）。在每个孔底部加入溶液，不要接触侧壁。
9.用盖子密封板，并在37℃孵育30分钟。
10.取下盖子，用洗涤缓冲液洗板5次。
11.向每个孔中加入50μlTMB底物A和50μlTMB底物B，盖上平板并在37℃下孵育15分钟。避免暴露于光。
12.向每个孔中加入50μl终止液，充分混匀。颜色应立即变为黄色。
13.阅读O.D.在微板读数器中在450nm的吸亮度在加入终止溶液的15分钟内。对于计算，（相对O.D.450）=（每个孔的O.D.450） - （零阱的O.D.450）。标准曲线可以作为每种标准溶液（Y）的相对O.D.450与标准溶液（X）的相应浓度作图。可以从标准曲线插入样品的人类YFV-IgM浓度。
14.注意：如果稀释样品，稀释倍数乘以内插法得到稀释前的浓度。

C.结果确定
1.试验有效性：阳性对照的平均值≥1.00; 阴性对照的平均值≤0.10。
2.临界值（CUT OFF）计算：临界值=负控制的平均值+0.15
3.阴性结果：如果OD值<CUT OFF，样品为人YFV-IgM阴性。
4.阳性结果：如果OD值≥CUTOFF，样品为人类YFV-IgM阳性。

D.注意事项
1.在实验之前，离心每个试剂盒组分数分钟，将所有试剂倒入试管底部。
2.在混合或重新组装部件时避免起泡或气泡。
3.洗涤缓冲液可结晶并分离。如果发生这种情况，请加热管以溶解。
4.建议每个对照和样品一式两份或重复测量三次。
5.不要让板在任何时候*干燥！这可以使板上的生物材料失活。
6.不要重复使用移液器吸头和管，以避免交叉污染。
7.不要使用不同套件中过期的组件或组件。
8.将TMB底物B储存在黑暗中，并且为了避免板温育对于温度差的边缘效应，建议在使用前在室温下使TMB底物平衡30分钟。用灭菌的吸头抽吸所需的剂量，不要将残留溶液倒回到小瓶中。

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怀孕
黄热病是黄热病疫苗管理的预防措施。怀孕期间黄热病疫苗接种的安全性尚未在大型前瞻性试验中进行研究。然而，在怀孕早期接受黄热病疫苗接种的妇女的研究发现，他们的婴儿没有发生重大畸形。注意到婴儿轻微，多为皮肤畸形的风险略有增加。报告说，接种疫苗的孕妇自发黄热病率较高，但在随后的研究中没有得到证实。根据研究（39％或98％），开发YFV特异性IgG抗体的孕妇接种疫苗的比例是不同的，可能与接种疫苗的三个月相关。因为怀孕可能会影响免疫功能，所以可以考虑血清学检测来记录疫苗的保护性免疫反应。
如果旅行是不可避免的，并且感染疫苗的风险超过YFV暴露的风险，孕妇应免除免疫接种，并颁布医疗豁免以履行卫生规定。必须前往接触YFV的地区的孕妇应接种疫苗。虽然没有具体数据，但ACIP建议女性在怀孕前接受黄热病疫苗后等待4周。
哺乳
母乳喂养是黄热病疫苗管理的预防措施。在母亲接受黄热病疫苗接种的*母乳喂养的婴儿中，已报告了三例YEL-AND病例。所有3名婴儿在接触时被诊断患有脑炎并且年龄<1个月。需要进一步的研究来记录通过母乳喂养潜在疫苗接种的风险。直到有更多的信息，母乳喂养妇女应避免黄热病疫苗。但是，如果不能避免或推迟养育母亲到黄热病地区的旅行，那么这些妇女应该接种疫苗。
其他考虑因素
对于其他慢性疾病（如肾脏疾病，丙型肝炎病毒感染，其他肝脏疾病或糖尿病）的患者给予黄热病疫苗后，没有关于可能增加的不良事件或疫苗效力降低的数据。如果考虑接种这类患者，应谨慎使用。评估患者一般免疫能力水平的因素包括疾病严重程度，持续时间，临床稳定性，并发症和合并症。
其他疫苗和药物的同时管理
没有证据表明灭活的疫苗会干扰对黄热病疫苗的免疫应答。因此，灭活疫苗可以同时或在黄热病疫苗接种之前或之后的任何时间施用。 ACIP建议与其他活病毒疫苗同时给予黄热病疫苗。否则，临床医生应该在接种疫苗之前等待30天，因为如果在另一次活病毒疫苗的30天内给药，对活的病毒疫苗的免疫应答可能会受损。一项关于在儿童中同时施用黄热病和麻疹 - 腮腺炎 - 风疹（MMR）疫苗的研究发现，在同一天给予疫苗，而间隔30天时，对黄热病，腮腺炎和风疹的免疫应答降低。需要进一步的研究来确认这些发现，但是他们建议如果可能的话，黄热病和MMR应相隔30天。有限的数据表明，口服Ty21a伤寒疫苗，一种活细菌疫苗，可以在黄热病疫苗之前或之后同时或以任何间隔进行施用。没有关于同时给予减毒流感和黄热病疫苗的免疫反应的数据。然而，减毒流感和MMR的数据没有发现干扰的证据。

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我司还提供其它进口或国产试剂盒：登革热、疟疾、乙脑、寨卡、黄热病、基孔肯雅热、克锥虫病、违禁品滥用、肺炎球菌、军团菌等试剂盒以及日本生研细菌分型诊断血清、德国SiFin诊断血清、丹麦SSI诊断血清等产品。

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quirements and recommendations for specific countries are available on the CDC Travelers’ Health page.
Serious adverse events can occur following yellow fever vaccination. Therefore, persons should only be vaccinated if they are at risk of exposure to yellow fever virus or require proof of vaccination for country entry.
To minimize the risk of serious adverse events, healthcare providers should carefully observe the contraindications and consider the precautions about vaccination prior to vaccine administration (see below). A medical waiver can be given for persons with a precaution about or contraindication to vaccination. More information about medical waivers is available on the CDC Travelers’ Health website.
For more information about the use of yellow fever vaccine in travelers or laboratory workers, see the Advisory Committee on Immunization Practice (ACIP) recommendations.
This vaccine is administered only at designated vaccination centers. Locations of centers are available from local health departments or at the CDC Travelers’ Health Yellow Fever website. For healthcare professionals who want to learn more about yellow fever disease and vaccine, a continuing education module is available.
Booster doses of the vaccine
In February 2015, the CDC Advisory Committee on Immunization Practices (ACIP) approved a new recommendation that a single dose of yellow fever vaccine provides long-lasting protection and is adequate for most travelers. The updated recommendations also identify specific groups of travelers who should receive additional doses and others for whom additional doses may be considered including:
Woman who were pregnant when first vaccinated
Persons who received a hematopoietic stem cell transplant following their last dose of yellow fever vaccine
Persons who are HIV-infected
Travelers who received yellow fever vaccine at least 10 years previously and who will be in a higher-risk setting based on season, location, activities, and duration of their travel
Laboratory workers who routinely handle wild-type yellow fever virus
The official ACIP recommendations were published on June 19, 2015 (see Advisory Committee on Immunization Practice (ACIP) recommendations. All current ACIP yellow fever vaccine recommendations can be found on the ACIP website.