Panbio黄热病病毒ELISA检测试剂盒（酶免法）

Panbio黄热病病毒ELISA检测试剂盒（酶免法）

广州健仑生物科技有限公司

本公司专业供应各种进口品牌黄热病检测试剂盒，包括美国的NovaBios、广州创仑等CDC品牌。主要包括胶体金、酶免、PCR等方法学。欢迎咨询

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黄热病毒核酸检测试剂盒（荧光探针PCR）

非洲安哥拉工作、旅游黄热病检测试剂盒

美国CDC的黄热病毒诊断试剂——美国的NovaBios

Panbio黄热病病毒ELISA检测试剂盒（酶免法）

【黄热病简介】
黄热病，历*称为黄色杰克，黄色瘟疫或青铜约翰，是一种急性病毒性疾病。在大多数情况下，症状包括发热，寒战，食欲不振，特别是在背部的肌肉痛，和头痛。症状通常在五天内改善。在一些人在一天内改善，发烧回来，腹痛发生，肝损伤开始导致黄色皮肤。如果发生这种情况，出血和肾脏问题的风险也增加。

【检测原理】
96孔板YFV-IgM/IgG特异性抗原。将对照或测试样品加入到合适的孔中并孵育。用洗涤缓冲液洗去游离组分。将HRP缀合的检测试剂加入到孔中。TMB底物用于显现HRP酶反应。TMB由HRP催化以产生在加入酸性停止溶液后变为黄色的蓝色产物。黄色的密度与板中捕获的样品的YFV-IgM/IgG量成比例。外径在微板读数器中在450nm下通过分光亮度计测量吸亮度，然后可以计算YFV-IgM/IgG的浓度。

产品规格：96T/盒
检测范围：定性
灵敏度：定性
储存和使用期：2-8℃ 储存12个月
产品应用：用于定性检测人血清，血浆，细胞培养上清液或任何生物液体中的YFV-IgM。

【套件组件】
1.一个96孔板预涂
2.阳性对照：0.5ml
3.阴性对照：0.5ml
4.洗涤缓冲液（30×）：20 ml。稀释：1:30
5.样品稀释缓冲液：6ml
6.6HRP酶联试剂（RTU）：6ml
7.终止液：6ml
8.TMB底物：6ml
9.TMB底物B：6ml
10.板密封：2
11.密封袋：1

【需要材料但不提供】
1.37℃培养箱
2.酶标仪（波长：450nm）
3.精确的移液器和一次性移液器吸头
4.自动洗板机
5.ELISA振荡器
1.5ml管
7.板盖
8.吸收滤纸
9.100ml和1L体积量筒。

【操作程序】
A.制备样品和试剂
1. 样品
收集并立即分析测试样品（2小时内）后立即分离。或等分并长期储存在-20°C。避免多个冻融循环。
细胞培养上清：以约2000-3000×rpm离心20分钟，以去除沉淀，立即分析或分装，并储存于-20℃。
血清：在室温下凝结血清（约4小时）。以约2000-3000×rpm离心20分钟。立即分析血清或等分，并储存在-20°C。
血浆：用柠檬酸盐或EDTA作为抗凝剂收集血浆。在收集30分钟内以2000-3000×rpm离心20分钟。立即分析或等分，并存储在-20°C冷冻。
尿：在无菌容器中收集，以2000-3000×rpm离心20分钟。立即分析或等分，并存储在-20°C冷冻。
组织：组织匀浆的制备将根据组织类型而变化。收集和冲洗样品在2-4℃下用PBS（Ph 7.4）。称重样品并用PBS（Ph 7.4）匀化，并对细胞悬浮液进行超声处理。以2000-3000×rpm离心20分钟。立即测定或等分并储存在-80℃。
（注意：1.*凝结血液样品，离心，避免溶血和沈淀。   2.NaN3不能用作试验样品防腐剂，因为它抑制HRP。）

2.洗涤缓冲液
用蒸馏水稀释浓缩洗涤缓冲液30倍（1/30）（即将20ml浓缩洗涤缓冲液加入580ml蒸馏水中）。

B.测定程序
在使用前将试剂盒组分和样品平衡至室温。建议绘制每个测试的标准曲线。
1.在预涂板上分别设置阳性/阴性，测试样品和对照（零）孔，并记录它们的位置。
2.将50μl的阴性和阳性对照等分到设定的孔中。
3.向对照（零）孔中加入50μl样品稀释缓冲液。
4.向测试样品孔中加入50μl适当稀释的样品（样品稀释比例：1：5）。在底部加入溶液而不接触侧壁。摇动平板以混合内容物。
5.用盖子密封板，并在37℃孵育30分钟。
6.取下盖子并通过在吸收性滤纸或其他吸收材料上敲击板来丢弃板内容物。
7.弃去溶液，用洗涤缓冲液洗涤板5次。不要让孔在任何时候*干燥。
手动清洗：丢弃溶液，不要接触侧壁。将吸水滤纸或其他吸收材料上拍出液体。将洗涤缓冲液填满每个孔，并在ELISA振荡器上轻轻涡流2 分钟。丢弃内容物，并将吸收性滤纸或其他吸收材料上的板敲打。洗板五次。
自动洗涤：弃去所有孔中的溶液，并用洗涤缓冲液洗涤板5次（用缓冲液过量填满孔）。在zui后的洗涤之后，翻转该板并敲击吸收性滤纸或其它吸收材料。建议将清洗器设置为1分钟的浸泡时间。
8.向每个孔中加入50μlHRP结合物的试剂（对照孔除外）。在每个孔底部加入溶液，不要接触侧壁。
9.用盖子密封板，并在37℃孵育30分钟。
10.取下盖子，用洗涤缓冲液洗板5次。
11.向每个孔中加入50μlTMB底物A和50μlTMB底物B，盖上平板并在37℃下孵育15分钟。避免暴露于光。
12.向每个孔中加入50μl终止液，充分混匀。颜色应立即变为黄色。
13.阅读O.D.在微板读数器中在450nm的吸亮度在加入终止溶液的15分钟内。对于计算，（相对O.D.450）=（每个孔的O.D.450） - （零阱的O.D.450）。标准曲线可以作为每种标准溶液（Y）的相对O.D.450与标准溶液（X）的相应浓度作图。可以从标准曲线插入样品的人类YFV-IgM浓度。
14.注意：如果稀释样品，稀释倍数乘以内插法得到稀释前的浓度。

C.结果确定
1.试验有效性：阳性对照的平均值≥1.00; 阴性对照的平均值≤0.10。
2.临界值（CUT OFF）计算：临界值=负控制的平均值+0.15
3.阴性结果：如果OD值<CUT OFF，样品为人YFV-IgM阴性。
4.阳性结果：如果OD值≥CUTOFF，样品为人类YFV-IgM阳性。

D.注意事项
1.在实验之前，离心每个试剂盒组分数分钟，将所有试剂倒入试管底部。
2.在混合或重新组装部件时避免起泡或气泡。
3.洗涤缓冲液可结晶并分离。如果发生这种情况，请加热管以溶解。
4.建议每个对照和样品一式两份或重复测量三次。
5.不要让板在任何时候*干燥！这可以使板上的生物材料失活。
6.不要重复使用移液器吸头和管，以避免交叉污染。
7.不要使用不同套件中过期的组件或组件。
8.将TMB底物B储存在黑暗中，并且为了避免板温育对于温度差的边缘效应，建议在使用前在室温下使TMB底物平衡30分钟。用灭菌的吸头抽吸所需的剂量，不要将残留溶液倒回到小瓶中。

（1）姓名应与病人的护照**。
（2）（2，5，7）所有日期应与数字一起输入，其后是月份，然后是年份。例如：在上述例子中，病人的出生日期是1960年3月22日。
（3）此空间用于病人的签名。
（4）黄热病疫苗接种时，应在两处处理“黄热病”。是否应将ICVP用于所需的疫苗接种或预防其他疾病或病症（按照“卫生条例”的修订或世界卫生组织的建议），该疾病或病症应写入该空间。另一方可列出其他疫苗接种。
（5）如上所述，输入疫苗接种的日期。
（6）临时医生的手写签名（邮票持有人或由邮票持有人*的其他医疗保健提供者 - 管理或监督疫苗管理（或预防））应出现在本框中。签名邮票是不可接受的。
（7）黄热病疫苗接种证明书（ICVP）自初次免疫接种日起10日起生效，应在“有效证明”框内注明。截至2016年7月，黄热病疫苗加药要求为在“卫生条例”中被淘汰，并且完整的ICVP被认为在接种者的一生中有效。建议在ICVP框中写入“证书有效期”为“接种人寿命”。但是，所有有黄热病疫苗接种入境要求的国家何时以及是否会采取这一改变是不确定的。有关国家黄热病疫苗接种入境要求的信息，请参阅“CDC旅行者健康”的目的地页面。
（8）疫苗接种中心的统一邮票应出现在此框内。
要求VERSUS建议
根据“卫生条例”证明黄热病接种的国家入境要求与CDC的建议不同。黄热病疫苗入境要求由国家建立，以防止YFV的输入和传播，并被允许在“卫生条例”下。旅行者必须遵守这些规定才能进入该国，除非已经获得医疗豁免。某些国家需要从所有国家抵达的旅客接种疫苗（表3-26），而一些国家则仅针对来自有YFV传播风险的国家的旅客进行疫苗接种（见本章末尾的“国家黄热病与疟疾信息”） ）。世界卫生组织将那些有YFV传播风险的地区定义为目前或过去报告发生黄热病的国家或地区，以及存在载体和动物水库的地区。国家要求可随时更改;因此，疾控中心鼓励旅客在出发前与相关大黄热病或领事馆核对。
关于黄热病疫苗建议的一节中的信息是疾控中心为防止旅行者感染YFV而提出的建议。随着YFV流通的变化，建议随时可能发生变化;因此，CDC鼓励旅行者检查目的地页面以获取的疫苗信息，并在出发前检查CDC上的相关旅行通知。
针对特定目的地的旅客的黄热病疫苗建议是基于YFV传播的风险分类：地方性，过渡性，低暴露潜力，无风险。推荐使用黄热病疫苗接种到地方性和过渡地区（地图3-14和3-15）。虽然通常不推荐接种疫苗接种到潜在潜力较小的地区，但可能会考虑到一小部分旅客，其行程可能会增加接触YFV的风险（例如长途旅行，大量接触蚊子或无法避免蚊虫叮咬）。不建议在没有风险的地区接受黄热病疫苗接种。

我司还提供其它进口或国产试剂盒：登革热、疟疾、乙脑、寨卡、黄热病、基孔肯雅热、克锥虫病、违禁品滥用、肺炎球菌、军团菌等试剂盒以及日本生研细菌分型诊断血清、德国SiFin诊断血清、丹麦SSI诊断血清等产品。

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(1) The name should be exactly the same as the patient's passport.
(2) (2,5,7) All dates should be entered with the numbers, followed by month, then year. For example: In the above example, the patient's birth date is March 22, 1960.
(3) This space is used for the patient's signature.
(4) yellow fever vaccination, should be dealt with in two "yellow fever". Whether ICVP should be used for the required vaccination or prevention of other diseases or conditions (as amended by the International Health Regulations or as recommended by the World Health Organization), which should be included in the space. The other side can list other vaccinations.
(5) Enter the date of vaccination as described above.
(6) The handwritten signature of the temporary medical practitioner (the holder of the stamp or the other health care provider authorized by the stamp holder - the management or supervision of the vaccine management (or prevention)) shall appear in this box. Signature stamps are unacceptable.
(7) The Yellow Fever Vaccine Certificate (ICVP) shall take effect from the date of the initial immunization date and shall be indicated in the "valid proof" box. As of July 2016, the yellow fever vaccine dosing requirement was eliminated in the International Health Regulations, and the complete ICVP was considered effective in the lifetime of the inoculant. It is recommended that the "certificate validity period" be written in the ICVP box as "Inoculum Life". However, it is uncertain whether all countries with yellow fever vaccination requirements and whether or not to take this change will be made. For the latest information on national vaccination requirements for yellow fever, please refer to the "CDC Traveler's Health" website's destination page.
(8) A unified stamp of the vaccination center should appear in this box.
Requires VERSUS recommendations
According to the International Health Regulations, the national entry requirements for yellow fever vaccination are different from those of the CDC. The yellow fever vaccine entry requirements are established by the state to prevent YFV from entering and disseminating and are allowed under the International Health Regulations. Travelers must comply with these requirements to enter the country unless a medical exemption has been obtained. Some countries require vaccinations for passengers arriving from all countries (Table 3-26), while others are vaccinated only for travelers from countries with YFV risk (see the National Yellow Fever and Malaria Information at the end of this chapter) ")). The World Health Organization defines those areas where the risk of YFV transmission is defined as a country or region where current or past reports of yellow fever, as well as areas where vector and animal reservoirs exist. National requirements can be changed at any time; therefore, the CDC encourages passengers to check with the relevant Yellow Yellow fever or consulate before departure.
The information in the section on the recommendations of the yellow fever vaccine is a recommendation made by the CDC to prevent travelers from infecting YFV. With the change in YFV circulation, it is advisable to change at any time; therefore, the CDC encourages travelers to check the destination page for the latest vaccine information and check the travel notice on the CDC website prior to departure.
The yellow fever vaccine recommendations for travelers for specific destinations are based on YFV risk classification: local, transitional, low exposure potential, risk free. We recommend the use of yellow fever vaccines to local and transitional areas (maps 3-14 and 3-15). Although vaccination is usually not recommended to areas with less potential potential, a small number of passengers may be taken, and their dikes may increase the risk of exposure to YFV (eg long-distance travel, exposure to mosquitoes or mosquito bite). It is not recommended to receive yellow fever vaccination in areas without risk.