48T/96T-TAP人胰蛋白酶原激活肽ELISA 说明书

TAP人胰蛋白酶原激活肽ELISA试剂盒 

小鼠骨特异性碱性磷酸酶ELISA检测BALP-B    Human Kallikrein 6,KLK 6 ELISA
小鼠转铁蛋白受体ELISA检测TFR/CD71    Human Fructose-1,6-bisphosphate aldolase,FDA ELISA
小鼠半胱氨酸蛋白酶抑制剂/胱抑素ELISA检测CCys-C    Human cathepsin D,cath-D ELISA
小鼠第八因子相关抗原ELISA检测FⅧAg    Human hormone sensitive lipase,HSL ELISA
TAP人胰蛋白酶原激活肽ELISA试剂盒   途：
用GsaR人促胃液素受体ELISA试剂盒STAP人胰蛋白酶原激活肽ELISA试剂盒 的含量。

小鼠酮酸激酶M2型同工酶ELISA检测M2-PK    Human pancreatickininogenase,PK ELISA
小鼠催乳素ELISA检测PRL    Human aconitase 2,ACO-2 ELISA
小鼠抵抗素ELISA检测Resistin    Human 26S proteasome,26S PSM ELISA
小鼠乙酰胆碱受体抗体ELISA检测AChRab    Human Cyclin-dependent kinase 4,CDK-4 ELISA
小鼠骨钙素/骨谷氨酸蛋白ELISA检测OT/BGP    Human Placental alkaline pkosphatase,PLAP ELISA
小鼠γ氨基丁酸ELISA检测GABA    Human receptor tyrosine kinase,RTKs ELISA
小鼠5羟色胺ELISA检测5-HT    Human mitogen activited protein kinase,MAPK ELISA
小鼠P物质受体ELISA检测SP-R    Human Lysozyme,LZM ELISA

步骤一

双抗体夹心法

1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃ 过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。（简称洗涤，下同）。

2.　加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。（同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔）。

3.　加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体（经滴定后的稀释度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小时，洗涤。

4.　加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。

5.　终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。

6.　结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm（若以ABTS显色，则410nm）处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。

ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。 ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。

然而，影响Elisa试验结果的因素很多，故加强各个环节的质量保证才能充分发挥其方法学的优点。