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兔子血小板衍生生长因子(PDGF)ELISA试剂盒实验ELISA结果判定常用的几种方法:
1)目测定性法:加入底物经酶解和终止反应后,肉眼观察阳性孔颜色明显深于(竞争法则浅于)阴性对照;与阴性对照的颜色接近者,判定为阴性。
2)以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2~3SD,作为阳性结果的阈值。
3)以P/N值(阳性孔OD值/阴性孔OD值)大于或等于2.1为阳性;P/N值小于2.1,但大于1.5为可疑;P/N小于1.5为阴性。
4)定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。
我们将在兔子血小板衍生生长因子(PDGF)ELISA试剂盒操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下,以期给客户带来一些启发,提高试验质量。
5382 小鼠孕激素/孕酮(PROG)ELISA Kit,48T/96T
5383 大鼠孕激素/孕酮(PROG)ELISA Kit,48T/96T
5384 兔子孕激素/孕酮(PROG)ELISA Kit,48T/96T
5385 人脱氢表雄酮硫酸酯(DHEA-S)ELISA Kit,48T/96T
5386 小鼠脱氢表雄酮硫酸酯(DHEA-S)ELISA Kit,48T/96T
5387 大鼠脱氢表雄酮硫酸酯(DHEA-S)ELISA Kit,48T/96T
5388 兔子脱氢表雄酮硫酸酯(DHEA-S)ELISA Kit,48T/96T
5389 牛雌二醇(E2)ELISA Kit,48T/96T
5390 犬雌二醇(E2)ELISA Kit,48T/96T
5391 人雌二醇(E2)ELISA Kit,48T/96T
5392 小鼠雌二醇(E2)ELISA Kit,48T/96T
5393 猪雌二醇(E2)ELISA Kit,48T/96T
5394 大鼠雌二醇(E2)ELISA Kit,48T/96T
5395 兔子雌二醇(E2)ELISA Kit,48T/96T
5396 鱼类*(Cortisol)ELISA Kit,48T/96T
5397 人*(Cortisol)ELISA Kit,48T/96T
5398 小鼠*(Cortisol)ELISA Kit,48T/96T
5399 猪*(Cortisol)ELISA Kit,48T/96T
5400 大鼠*(Cortisol)ELISA Kit,48T/96T
5401 兔子*(Cortisol)ELISA Kit,48T/96T
5402 人促甲状腺素(TSH)ELISA Kit,48T/96T
5403 小鼠促甲状腺素(TSH)ELISA Kit,48T/96T
5404 大鼠促甲状腺素(TSH)ELISA Kit,48T/96T
5405 兔子促甲状腺素(TSH)ELISA Kit,48T/96T
5406 人抗巨噬细胞抗体(anti-macrophage Ab)ELISA Kit,48T/96T
5407 人抗精子抗体(AsAb)ELISA Kit,48T/96T
5408 小鼠抗精子抗体(AsAb)ELISA Kit,48T/96T
5409 大鼠抗精子抗体(AsAb)ELISA Kit,48T/96T
5410 人抗子宫内膜抗体(EMAb)ELISA Kit,48T/96T
5411 小鼠抗子宫内膜抗体(EMAb)ELISA Kit,48T/96T
5412 大鼠抗子宫内膜抗体(EMAb)ELISA Kit,48T/96T
5413 人1,25二羟基*3(1,25-(OH)2D3/DVD/DHVD 3
5414 人衰变加速因子(DAF/CD55)ELISA Kit,48T/96T
5415 人内皮脂肪酶(EL)ELISA Kit,48T/96T
5416 小鼠内皮脂肪酶(EL)ELISA Kit,48T/96T
5417 大鼠内皮脂肪酶(EL)ELISA Kit,48T/96T
5418 人可溶性核因子κB受体活化因子配基(sRANKL)ELISA Kit,48T/96T
5419 小鼠可溶性核因子κB受体活化因子配基(sRANKL)
5420 大鼠可溶性核因子κB受体活化因子配基(sRANKL)
5421 鱼骨钙素/骨*蛋白(OT/BGP)ELISA Kit,48T/96T
5422 人骨钙素/骨*蛋白(OT/BGP)ELISA Kit,48T/96T
5423 小鼠骨钙素/骨*蛋白(OT/BGP)ELISA Kit,48T/96T
5424 猪骨钙素/骨*蛋白(OT/BGP)ELISA Kit,48T/96T
5425 大鼠骨钙素/骨*蛋白(OT/BGP)ELISA Kit,48T/96T
5426 人降钙素(CT)ELISA Kit,48T/96T
5427 小鼠降钙素(CT)ELISA Kit,48T/96T
5428 大鼠降钙素(CT)ELISA Kit,48T/96T
5429 *(SCT)ELISA Kit,48T/96T
5430 人骨特异性碱性磷酸酶B(ALP-B)ELISA Kit,48T/96T
5431 小鼠骨特异性碱性磷酸酶B(ALP-B)ELISA Kit,48T/96T
5432 大鼠骨特异性碱性磷酸酶B(ALP-B)ELISA Kit,48T/96T
5433 人全段甲状旁腺素(i-PTH)ELISA Kit,兔子血小板衍生生长因子(PDGF)ELISA试剂盒48T/96T
5434 小鼠全段甲状旁腺素(i-PTH)ELISA Kit,48T/96T
5435 大鼠全段甲状旁腺素(i-PTH)ELISA Kit,48T/96T
5436 人*受体(VD R)ELISA Kit,48T/96T
下面我们分析Elisa试验操作中可能影响结果的原因,并给出相应的解决办法:
1 选择试剂:选择质量优良的检测试剂,严格按照试剂说明书进行操作,操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。
2 加样:可能原因:
1)血清或血浆标本分离不好即进行加样;
2)手工操作中,加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长(特别是室内温度较高时); 3)加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。
解决办法:
1) 标本为血清:将血液先自然存放1-2小时后,再用3000rmp离心15分钟;标本为血浆:必须使用含抗凝剂的血液标本收集管,采血后必须立即颠倒*混合5-10次,放置一段时间后,3000rpm离心15分钟;若在几天内检测,可放在2-8℃冰箱中,若要贮存,则置于-20℃的低温冰箱内。
2) 加样后及时放入孵箱。
3) 加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自动加样,选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。
5) 标本较多时,请分批操作。
3 孵育:可能原因:
1) 孵育时未贴封片或加盖,使标本或稀释液蒸发,吸附于孔壁,难于清洗*;
2) 孵育时间人为延长,导致非特异性结合紧附于反应孔周围,难以清洗*。解决办法:
1) 贴封片或加盖;
2) 按说明步骤严格控制操作时间。
4 洗板:可能原因:
1) 采用手工洗板,孔与孔之间液体交叉。
2) 采用半自动洗板机洗板时,洗液量不足,导致洗板不*;洗板针堵塞,抽吸不*;洗板不畅,导致洗板效果差。
3) 反应板过多造成洗板等待时间长。 解决办法:
1) 保证洗液注满各孔,洗板针畅通,洗完板后在吸水纸(选择干净、无或少尘的吸水材料)上轻轻拍干;
2) 合理安排,或多用几台洗板机。
5 兔子血小板衍生生长因子(PDGF)ELISA试剂盒显色:可能原因:
1) 显色剂配制后放置时间过长或使用过期显色剂;
2) 加显色剂时溅出孔外造成液体回流。解决办法:
1) 显色剂尽量在临用前配制,坚持不用过期显色剂,肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用; 2) 加样时保持显色剂不外流;
3) A、B液应避免接触金属器械。
6 终止:可能原因如加终止液时产生较多气泡,导致假阳性增加。所以在加终止液时应避免产生气泡。
7 读板:如读板时板底不清洁等。应保证酶标板清洁。
所以在整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸; 尽可能实现ELISA检测标准自动化,有效提高检测质量。
在实际操作中,除了选择优良试剂外,必须严格按照操作步骤进行操作,同时作好室内质控、室间质评,以严谨的工作作风检测每一份标本,才能保证检测质量。现在国内已有相当数量的单位拥有全自动酶标仪,这对于实现ELISA标准化检测、提高检测质量起到了重要作用。
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